Medical Clinic

Colágeno Tipo IV: Um Bio Marcador Não Invasivo para Detectar Hepatites Não Alcoolizadas (NASH), Entre Pacientes com Doenças Graxas Não Alcoólicas (NAFLD)

SURAPANENI KM, SARASWATHI P, SHYAMA S, SUBRAMANIAM S

* Departamento de Bioquímica, ** Departamento de Anatomia, Saveetha Medical College & Hospital, Universidade de Saveetha, Thandalam, Chennai - 602 105, TN, (ÍNDIA). *** Departamento de Bioquímica, Apollo Hospitals, Chennai - 600 006, TN, ÍNDIA.

Em Endereço para correspondência : 
Surapaneni KRISHNA MOHAN, 
Assistente Professor, 
Departamento de Bioquímica, 
Saveetha College estão & Medical | Hospital são, 
Campus Universitário Saveetha, 
Thandalam ,: Chennai - 602 105, o TN, Índia. 
EMail: krishnamohan_surapaneni@yahoo.com

 

 

Abstrato

Introdução: A doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) engloba um espectro de doença que varia de esteatose hepática simples a esteato-hepatite (NASH), fibrose e cirrose. Está se tornando a principal causa de encaminhamento para clínicas de fígado na maioria das áreas. A prevalência de DHGNA é mais provável que continue a aumentar. Obesidade, hiperglicemia, diabetes mellitus tipo 2 e hipertrigliceridemia são os fatores de risco mais importantes. Fatores genéticos, sem dúvida, predispõem à DHGNA. A DHGNA tem o potencial de progredir para carcinoma hepatocelular ou insuficiência hepática, sendo ambos eventos que levam à morte precoce. 
Objetivo: Avaliar o teste de Colágeno Tipo-NASH, um novo marcador biológico para Hepatites Não Alcoólicas de Steato em pacientes com doença hepática gordurosa não alcoólica. 
Materiais e métodos:69 pacientes com doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) que foram diagnosticados por ultra-sonografia e idade e sexo pareados 69 indivíduos saudáveis ​​normais como controles, foram selecionados para este estudo. Os níveis séricos de colágeno tipo IV, perfil lipídico e parâmetros do teste de função hepática foram estimados em pacientes e comparados com controles. 
Resultados: Os níveis de colágeno tipo IV foram significativamente aumentados em pacientes com EHNA entre os pacientes com DHGNA quando comparados aos controles. Quando comparados aos parâmetros do teste da função hepática e aos níveis do perfil lipídico, constatou-se que a NASH tinha um valor preditivo negativo positivo entre os pacientes com DHGNA. 
Conclusão: Em pacientes com DHGNA, o teste de colágeno tipo IV foi considerado um teste simples, não invasivo e confiável para prever a presença ou ausência de EHNA.

 

 

Palavras-chave

- IV Colagénio, fibrose hepática, Doença Hepática Gordurosa Não Alcoólica (NAFLD), Hepatite Steato Não Alcoólica (NASH).

Como citar este artigo:

SURAPANENI KM *, SARASWATHI P **, SHYAMA S ***, SUBRAMANIAM S ***. COLAGÉNIO TIPO IV: BIO MARCADOR NÃO INVASIVO PARA DETECTAR HEPATITE NÃO - ALCOÓLICA DE STEATO (NASH), ENTRE PACIENTES COM DOENÇA NÃO GORDURA NÃO ALCOÓLICA DE FÍGADOS (NAFLD). Jornal de Pesquisa Clínica e Diagnóstica [serial on-line] 2010 junho [citado: 2018 31 de agosto]; 4: 2483-2488. Disponível em 
http://www.jcdr.net/back_issues.asp?issn=0973-709x&year=2010&month=June&volume=4&issue=3&page=2483-2488&id=751

 

Introdução
A Esteato-Hepatite Não Alcoólica (EHNA) é uma forma avançada de Doença Hepática Gordurosa Não Alcoólica (DHGNA) e tem pelo menos três componentes entre os tumores de esteatose, lesão hepatocelular, inflamação do tipo celular misto focal e fibrose (1) . A fibrose hepática é o estágio final comum da maioria das doenças hepáticas crônicas, independentemente da etiologia, e sua progressão leva a cirrose e câncer de fígado (2) . A prevalência de pessoas com sobrepeso está aumentando em países desenvolvidos e em desenvolvimento (3) . A metamorfose gordurosa no fígado é comum nesses indivíduos obesos e a doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) tornou-se ampla com o aumento da prevalência da obesidade (4).. Na Índia, a prevalência de DHGNA tem aumentado recentemente (5) , o que pode ser atribuído às mudanças no estilo de vida, incluindo a inatividade física e um aumento no consumo diário de gordura. Tem sido sugerido que a progressão de esteatose simples para esteato-hepatite e fibrose avançada é causada por dois eventos distintos. Em primeiro lugar, a resistência à insulina leva ao acúmulo de gordura nos hepatócitos e, em segundo lugar, as espécies reativas mitocondriais de oxigênio causam peroxidação lipídica, indução de citocinas e a indução do ligante Fas. Os produtos da peroxidação lipídica e algumas citocinas podem desencadear a resposta inflamatória no fígado, que causa diretamente o dano celular ou atrai as células inflamatórias para o parênquima hepático (6).. A maioria dos pacientes com DHGNA tem um curso clínico benigno, mas alguns pacientes evoluem para doença hepática avançada, cirrose hepática ou mesmo carcinoma hepato-celular (7) . A EHNA é uma forma grave de DHGNA e está fortemente associada à idade avançada, obesidade e diabetes mellitus tipo II (8) . O diagnóstico definitivo de NASH requer biópsia hepática, mas é um procedimento invasivo que pode causar complicações indesejáveis. As condições clínicas da biópsia hepática devem ser limitadas em pacientes com DHGNA com probabilidade de ter EHNA ou fibrose significativa. A alteração fibrótica hepática é um achado patológico importante para o estágio da DHGNA ou para determinar o prognóstico da DHGNA (9) . Os pacientes com DHGNA com fibrose grave têm prognóstico ruim (10). Muitas variáveis ​​clínicas têm sido propostas como preditores de fibrose grave em pacientes com DHGNA, como idade avançada, diabetes mellitus tipo II, obesidade, níveis séricos de transaminases, contagem de plaquetas periféricas, etc. 

Marcadores bioquímicos de fibrose hepática estão fortemente associados ao grau de fibrose em pacientes com hepatite viral crônica (11) . No entanto, muito pouca informação e apenas poucos dados estavam disponíveis sobre a utilidade dos marcadores não invasivos de fibrose hepática, a fim de avaliar o grau de fibrose hepática em pacientes com NASH entre os pacientes com DHGNA.

O presente estudo é uma tentativa de avaliar o colágeno tipo IV como um novo marcador biológico para a hepatite Steato Não Alcoólica em pacientes com doença hepática não alcoólica gordurosa em um estágio inicial. Em nosso país, atualmente 10 a 28% da população geral sofre de Doenças Hepáticas Gordurosas Não Alcoólicas (DHGNA), das quais cerca de 3 a 5% sofrem de Hepatite Não Alcoolizada (EHNA), que progride até o estágio final do fígado. doença. Assim, se pudermos diagnosticar e tratar os pacientes no estágio NASH, poderemos salvar a vida desses pacientes de doença hepática terminal.

 

 

Material e métodos

O estudo foi realizado no Departamento de Bioquímica, Saveetha Medical College e Hospital, Saveetha University, Chennai, TN, Índia e do Departamento de Bioquímica, Apollo Hospitals, Chennai, TN, na Índia. Sessenta e nove indivíduos que foram diagnosticados com hepatite não alcoólica foram escolhidos como os sujeitos do estudo. O diagnóstico de esteato-hepatite não alcoólica foi feito de acordo com os seguintes critérios: 1) testes de função hepática alterados por pelo menos três meses e ausência de história pregressa de doença hepática; 2) diagnóstico ultra-sonográfico de esteatose hepática; 3) diagnóstico histológico de infiltração gordurosa, lobular ou inflamação portal e / ou corpos de Mallory, fibrose ou cirrose. Em todos os doentes, os níveis séricos de aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT), bilirrubina total, foram medidos gamma-glutamil transpeptidase (GGT), colesterol total, triglicérides, HDL-colesterol, LDL-colesterol e colesterol / HDL. Igual número de voluntários saudáveis ​​sem história de doença hepática, uso de drogas, cirurgia ou consumo de álcool, com testes bioquímicos de função hepática e exame ultrassonográfico do fígado dentro dos limites normais, foram selecionados como grupo controle. A permissão devida foi obtida do comitê de ética da instituição antes do início do estudo. Os consentimentos escritos também foram retirados dos pacientes antes do estudo e os objetivos do estudo foram totalmente explicados. A história clínica e pessoal completa dos sujeitos foi registrada. Igual número de voluntários saudáveis ​​sem história de doença hepática, uso de drogas, cirurgia ou consumo de álcool, com testes bioquímicos de função hepática e exame ultrassonográfico do fígado dentro dos limites normais, foram selecionados como grupo controle. A permissão devida foi obtida do comitê de ética da instituição antes do início do estudo. Os consentimentos escritos também foram retirados dos pacientes antes do estudo e os objetivos do estudo foram totalmente explicados. A história clínica e pessoal completa dos sujeitos foi registrada. Igual número de voluntários saudáveis ​​sem história de doença hepática, uso de drogas, cirurgia ou consumo de álcool, com testes bioquímicos de função hepática e exame ultrassonográfico do fígado dentro dos limites normais, foram selecionados como grupo controle. A permissão devida foi obtida do comitê de ética da instituição antes do início do estudo. Os consentimentos escritos também foram retirados dos pacientes antes do estudo e os objetivos do estudo foram totalmente explicados. A história clínica e pessoal completa dos sujeitos foi registrada. A permissão devida foi obtida do comitê de ética da instituição antes do início do estudo. Os consentimentos escritos também foram retirados dos pacientes antes do estudo e os objetivos do estudo foram totalmente explicados. A história clínica e pessoal completa dos sujeitos foi registrada. A permissão devida foi obtida do comitê de ética da instituição antes do início do estudo. Os consentimentos escritos também foram retirados dos pacientes antes do estudo e os objetivos do estudo foram totalmente explicados. A história clínica e pessoal completa dos sujeitos foi registrada.


Critérios de inclusão
 Doentes com diagnóstico ultra-sótico de esteatose hepática e com um aumento persistente de pelo menos 1,5 vezes o limite superior da normalidade da aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e / ou γ-glutamil transpeptidase (γ-GT ) foram estudados níveis por um período mínimo de três meses. 
 Pacientes com suspeita de DHGNA hospitalizados e com esteatose na biópsia hepática foram incluídos. 

Critério de exclusão
 Os critérios de exclusão incluíram consumo diário de álcool de pelo menos 50 g de equivalente de etanol puro para homens e 30 g para fêmeas no ano anterior, a incidência de hepatopatias concomitantes (presença de anticorpo anti-HCV ou antígeno HBs, hepatite auto-imune, hemocromatose diagnosticada por marcadores genéticos, doença de Wilson, deficiência de alfa-tripsina, presença de anticorpos contra o HIV e imunossupressão e intervalo superior a 3 meses entre a coleta de soro e a biópsia hepática. 
 Pacientes com diabetes mellitus não insulino-dependente (NIDDM), tomando drogas hepatotóxicas, com doenças sistêmicas ou infecções, aqueles que apresentavam vírus da hepatite B ou C ou outra doença hepática concomitante foram excluídos.
 Pacientes com sinais clínicos e / ou ultrassonográficos de insuficiência hepática e / ou hipertensão portal também foram excluídos. 

Os controles e os sujeitos do estudo foram divididos em dois grupos. 

Grupo 1 (Controles): Sessenta e nove voluntários saudáveis ​​com status socioeconômico semelhante foram escolhidos como controles. 

Grupo 2 (sujeitos do estudo): Sessenta e nove pacientes com hepatite Steato não alcoólica clinicamente diagnosticada foram escolhidos como sujeitos do estudo.

As amostras de sangue venoso obtidas destes sujeitos de manhã após um jejum durante a noite foram utilizadas para a análise. O soro foi separado por centrifugação a 1 000 g durante 15 minutos a + 40 ° C. O soro separado foi utilizado para a estimativa do perfil lipídico, testes de função hepática (LFT) e colágeno tipo IV. Perfil lipídico e LFT foram estimados usando métodos kit e um autoanalisador Hitachi - 912. Os níveis de Colágeno Sérico Tipo IV foram estimados pelo Imunoensaio Turbidométrico de Látex (LTIA), usando dois tipos de anticorpos eo kit PANASSAY IV C para a determinação do colágeno Tipo IV humano no soro. Cuidados necessários foram tomados durante a coleta da amostra, armazenamento e ensaio. 

produtos quimicos
Todos os reagentes utilizados foram de grau de reagente analítico ou o grau mais elevado disponível e foram obtidos da Sigma Chemicals, St.Louis, MO, EUA. 

Análise Estatística:
A análise estatística entre os grupos 1 (controles) e 2 (pacientes) foi realizada pelo teste t de Student independente, utilizando o pacote estatístico SPSS for Windows, versão 15. Os dados foram expressos como média + DP. Valores de p <0,05 foram considerados significativos.
 

 

 

 

Resultados

Houve um aumento estatisticamente significante nos níveis de colágeno Tipo IV - no soro dos pacientes com esteato-hepatite não alcoólica quando comparados aos controles. Um perfil lipídico adverso, isto é, níveis séricos de colesterol, triglicérides e colesterol LDL significativamente elevados, juntamente com níveis de colesterol HDL inalterados, também foram observados em pacientes com esteatose hepática não alcoólica, em comparação com controles. Parâmetros alterados de teste da função hepática também foram observados em pacientes com hepatite por esteatose não alcoólica em comparação com os controles. 
A comparação do perfil lipídico sérico do grupo de estudo e do grupo controle é mostrada na (Tabela / Fig. 1) . 

A comparação dos parâmetros séricos do teste da função hepática do grupo de estudo e do grupo controle são mostrados na(Tabela / Fig. 2). 

A média + DP do Tipo IV - Colágeno nos controles e nos pacientes com hepatite por Steato não alcoólica é descrita na (Tabela / Fig. 3) e (Tabela / Fig. 4) .

 

 

Discussão

No presente estudo, um perfil lipídico adverso, ou seja, níveis séricos de colesterol, triglicérides e colesterol LDL significativamente elevados, juntamente com níveis de colesterol HDL inalterados, foi observado em pacientes com hepatite aguda não alcoólica, em comparação com controles. Parâmetros alterados de teste da função hepática também foram observados em pacientes com hepatite por esteatose não alcoólica em comparação aos controles. A DHGNA é atualmente a doença hepática mais prevalente em todo o mundo. A esteato-hepatite não alcoólica é uma doença assintomática em grande proporção (48% -100%) dos pacientes. As características laboratoriais da NASH não são diagnósticas. Embora elevações leves a moderadas dos níveis séricos de aminotransferase estejam presentes em 70% -100% dos pacientes com EHNA, não há correlação significativa entre o grau de elevação da aminotransferase sérica e as características histológicas ((12) , (13) . Níveis elevados de aminotransferase não podem ser usados ​​para distinguir a esteatose benigna da EHNA, pois a esteatose isolada pode causar elevação, mesmo sem evidência de lesão celular evidente na biópsia hepática (14) , (15) . 

A diferenciação entre essas formas de DHGNA pode ser realizada com segurança apenas pela biópsia hepática (16) . No entanto, devido à alta prevalência da doença, seria necessário encontrar parâmetros não invasivos que permitissem a seleção de pacientes com maior risco de desenvolver cirrose para serem submetidos à biópsia, apesar do pequeno risco de mortalidade e morbidade.

No presente estudo, os níveis de colágeno tipo IV foram significativamente aumentados em pacientes com hepatite não alcoólica quando comparados aos controles. A doença hepática crônica é uma série de distúrbios progressivos que culminam na cirrose hepática e naqueles que são caracterizados por quantidades excessivas de colágeno depositado. O colágeno tipo IV é o principal componente de colágeno da membrana basal, sendo co-distribuído com laminina no espaço perisinusoidal (17) , (18) . Estudos em pacientes com doença hepática crônica demonstraram uma relação entre os valores séricos de COL-IV e a gravidade da fibrose hepática (19) , (17) .

Embora vários tipos de colágeno tipo I, III, IV, V e VI aumentem proporcionalmente no fígado com a progressão da fibrose, o colágeno tipo IV, um constituinte da membrana basal, é particularmente importante e digno de nota pelos seguintes motivos: relacionar o agravamento do dano hepatocelular e disfunção hepatocelular, para desempenhar um papel importante na regeneração hepatocelular, para desempenhar um papel importante na regeneração hepatocelular e no rearranjo da arquitetura lobular e para o tipo mais precoce de colágeno a ser sintetizado pelos hepatócitos em lesões hepáticas experimentais. Relatos similares de níveis elevados de colágeno Tipo IV no soro foram relatados por VNDOS santos et al (20).

 

 

Conclusão

Os níveis de colágeno tipo IV aumentaram significativamente em pacientes com EHNA entre os pacientes com DHGNA quando comparados aos controles. Quando comparados aos parâmetros do teste da função hepática e aos níveis do perfil lipídico, constatou-se que a NASH tinha um valor preditivo negativo positivo entre os pacientes com DHGNA. 

Em pacientes com DHGNA, o teste de colágeno tipo IV foi considerado um teste simples, não invasivo e confiável para prever a presença ou ausência de EHNA.

 

 

 

Reconhecimento

Este trabalho foi apresentado como uma apresentação em papel na 35ª Conferência Anual dos Bioquímicos Clínicos da Índia (ACBICON 2008) de 19 a 21 de dezembro de 2008, Kolkata, Índia e o mesmo resumo foi publicado no Indian Journal of Clinical Biochemistry (IJCB). , Volume 23, Suplemento de 2008. 

Além disso, eu sou muito grato a Dr.S.Porchelvan, M.Sc., MBA, PGDCA., PhD., Professor de Bioestatística por me ajudar na realização das análises estatísticas.

 

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